TRIzol试剂-RNAi技术-试剂-生物在线
上海沪震实业有限公司
TRIzol试剂

TRIzol试剂

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产品名称: TRIzol试剂

英文名称: TRIzol Reagent

产品编号: HZ0010

产品价格: 0

产品产地: 中国/上海

品牌商标: 沪震生物

更新时间: 2023-08-17T10:24:20

使用范围: null

上海沪震实业有限公司
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 TRIzol试剂

中文名称:TRIzol试剂
英文名称:TRIzol Reagent
产品规格:100 ml
TRIzol Reagent是一种可用于提取动植物和细菌来源的组织或细胞RNA的制品。样本在进行匀浆的过程中,TRIzol Reagent能够充分破坏细胞,裂解细胞内含物,同时可高效抑制RNA酶的活性,从而保持RNA的完整性。TRIzol Reagent具有很强的广谱性,可以适用于各种样品的总RNA提取,提取过程方便快速,整个操作在一小时内便可以完成。该试剂可用于小量样品(20-100mg组织、1×106细胞)也适用于大量样品(≥1g组织、>107细胞);对人、动物、植物组织、细菌均适用,可同时处理大量不同样品,整个提取过程在一小时内即可完成。分离的总RNA无蛋白质和DNA污染,可用于Northern Blot、Dot blot、ployA筛选、体外翻译、RNase保护分析和基因克隆。

样本量及 RNA 产量:

样本类型 样本量 产量
白细胞 1×106 10~20μg
植物材料 25mg 10~20μg
细胞 1×106 8~15μg
肌肉/脑等组织 50mg 10~25μg
肝脏组织 50mg 100~300μg



储存:2-8℃避光保存,可保存 2 年。
注意:该试剂含有强变性剂,请勿直接于皮肤接触或吞咽,若接触到皮肤或眼睛请尽快到医院处理。实验时务必穿实验服,戴手套。
自备试剂:氯仿,异丙醇,70%乙醇(DEPC 水配置),RNase-Free H2O。

操作方法:

一、实验前准备:
RNA 制备的关键是要抑制细胞中的RNA 分解酶和防止所用器具及试剂中的RNA 分解酶的污染。因此,在实验中必须采取以下措施:戴一次性干净手套;使用RNA 操作专用实验台;在操作过程中避免讲话等等。通过以上办法可以防止实验者的汗液、唾液中的RNA 分解酶的污染。
注意事项:
1. 尽量使用一次性塑料器皿,若用玻璃器皿,应在使用前用0.1%DEPC 水溶液在37℃处理 12h,然后在120℃高压灭30分钟 以除去残留的DEPC。
2. 用于 RNA 实验的试剂,须使用干热灭菌(180℃,60min)或使用上述方法进行 DEPC 水处理灭菌后的玻璃容器盛装(也可以使用RNA 实验用的一次性塑料容器),使用的无菌水须用0.1%的DEPC 处理后再进行高温高压灭菌。
3. RNA 实验用的试剂和无菌水都应专用,避免混用后交叉污染。

二、实验操作:
TRIzol Reagent的使用量情况如下:

10cm2贴壁培养细胞 1ml
1×106~10×106悬浮培养细胞 1ml
50-100mg的普通组织样品(肌肉等) 1ml
30-50mg的特殊组织样品(肝、脾等) 1-2ml
30-50mg的植物材料 1ml
白细胞(1×106 1ml



TRIzol 使用方法:

  贴壁细胞 悬浮细胞、酵母、细菌 动植物组织
1.样品预处理 每 10 cm2 生长的培养细胞中倒出培 养液,用PBS 清洗一次,尽可能移 除多余的溶液。 将悬浮培养细胞连同培养液一起 倒入离心管中,8,000 rpm离心2分钟,弃上清,加入50μl无菌水 重悬细胞至无明显沉淀。 将样品转移至用液氮预冷的研钵中,用研杵研磨组织,其间不断加 入液氮,直至研磨成粉末状。
2.加入TRIzol 加入1ml TRIzol,使裂解液均匀分布 于细胞表面,然后使用移液枪吹打细 胞使其脱落。将细胞的裂解液转移至 1.5ml EP管中。 加入1ml TRIzol。 将研磨好的组织加入到装有 1ml TRIzol的1.5ml EP管中。
3.裂解样品 加入TRIzol 后立即手腕用力上下颠倒至细胞、组织粉末等分散均匀,无块状物。室温静置 5分钟,使核酸蛋白 复合物完全分离。
4.加氯仿 加入200μl 氯仿,手腕用力振荡 15s,室温放置 2分钟。
5.离心分层 13000rpm离心10分钟,吸取600μl无色上清至新的1.5EP管中。
6.加异丙醇 向上述600μl上清液中加入600μl 异丙醇,手腕用力上下颠倒数次,于-20℃放置 5分钟。
7.离心沉淀总RNA 13000rpm离心10分钟,小心倒掉上清,留取底部总RNA 沉淀。
8.漂洗总RNA 向沉淀中每管加入1ml 70%乙醇,上下颠倒数次,13000rpm离心5分钟,小心倒掉上清,留取底部 RNA 沉淀。
9.重复漂洗一次 重复步骤8再洗涤一次。
10.挥发残留乙醇 倒掉洗液,再次短离心10s 后,用10μl Tip 头吸干剩余的洗液,置于室温使乙醇挥发干净(~20分钟)。
11.溶解总RNA 每管加入20~100μl TE Buffer或Rnase-Free H2O溶解总RNA。



常见问题分析:
1.抽提率低。
  可能原因:
  a. 样品裂解或匀浆处理不彻底;
  b. RNA 沉淀未完全溶解。
2.A260/A280<1.65。
  可能原因:
  a. 检测吸光度时,RNA 样品没有溶于水,而溶于了TE中;
  b.样品匀浆时加的组织量过多;
  c.分层后,吸取上清液不足 500μl;
  d.吸取水相时混入了有机相。
3.DNA 污染过多。
  可能原因:
  a. 样品匀浆时加的试剂量太少或组织量过多;
  b. 样品中含有有机溶剂。
  解决方法:使用该试剂通常基因组DNA 污染含量<0.1ng/μl,如需要彻底去除DNA的污染,请使用Rnase-Free DNase I消化去除基因组DNA 污染。如使用cDNA 第一链反转录试剂盒(含基因组去除剂)则无需提前消化去除基因组DNA 污染,该试剂盒中包含了去除基因组DNA 污染的试剂。 

特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!