叶绿体蛋白提取试剂盒

中文名称：叶绿体蛋白提取试剂盒
英文名称：Chloroplast protein extraction kit
产品规格：50T|100T
叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的,由于具有这一重要功能，所以叶绿体一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。
叶绿体蛋白提取试剂盒用简便快速的方法可以从各种植物样本中提取得到叶绿体总蛋白。
本试剂盒适用于提取新鲜植物样本的叶绿体蛋白，用于冻存样本的提取时由于冻存过程中大部分叶绿体会被破坏，叶绿体蛋白回收率较低。
本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解叶绿体膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。
本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒不含有EDTA，与金属螯合层析等下游应用兼容。
本试剂盒采用非酶法提取，提取过程简单方便，速度快，可在1小时内完成，而且绝少交叉污染，但是蛋白回收率相比酶法较低。酶法提取制备的叶绿体总蛋白，回收率提高，蛋白纯度高，保持天然活性，但是耗时较长。如果需要更加快捷的提取试剂盒，可以选择非酶法的提取试剂盒，对提取速度没有要求的话，可以选择酶法提取试剂盒。
本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用我公司其他货号的试剂盒。也可以将最后样本除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理。

储存条件：蛋白酶抑制剂-20℃保存；蛋白提取液2-8℃保存。
有效期：一年。
【注】
●蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃保存，开盖使用后-20℃保存
●蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。

试剂盒以外自备试剂和仪器：
● 移液器、吸头 ●离心机及离心管 ● 100μm细胞筛
● 振荡器、涡旋混匀器、Dounce匀浆器 ●冰箱，冰盒

使用方法：
1．提取液制备：
每200μl预冷的蛋白提取液C中加入1μl蛋白酶抑制剂，混匀后置冰上备用。
【注】：
● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
2．取200-500mg新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。
3．加入1ml-2ml试剂A，用组织搅碎机/匀浆机/Dounce匀浆器充分匀浆。
4．将匀浆液用100μm细胞筛过滤。
【注】：
● 没有细胞筛的话，在4℃，稍微静置，让粗纤维，成团组织块等沉降，或者以低于100g力条件下离心1分钟，收集细胞上清，弃组织沉淀。
●有些含粘液较多的样品可能难以吸取，可以将1ml吸头尖稍微剪掉一点使用。
● 液体量较少细胞筛不好过滤时可以补加2ml PBS缓冲液后过滤。
5．将滤液在500g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
6．将上清在800g条件下离心5分钟，弃沉淀，收集上清。
7．将上清3000g力离心10分钟，弃上清，收集沉淀。
8．将沉淀用试剂B重悬。
9．将悬液3000g力离心10分钟，弃上清，收集沉淀。
10．在沉淀中加入200-300μl叶绿体蛋白提取液C，充分混匀。
【注】：
● 每400μl蛋白提取液C加入2μl蛋白酶抑制剂混合物。
11．在4℃条件下振荡20-45分钟。
【注】：
●试剂C处理时间根据预实验结果调整。至叶绿体充分裂解，离心后沉淀体积减少。
● 振荡时用振荡器/摇床的较低转速，保持液体稍微晃动即可。
● 没有振荡条件也可不振荡，稍微延长试剂C处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
12．在4℃，12000g条件下离心15分钟。
13．将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到叶绿体总蛋白。
14．将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
【注】：
● 建议用BCA法进行蛋白定量。
●蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。 

特别提示：本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！